那还行,只要不是一下子死太多,就说明实验还是比较顺利的。当然才过去一天,这么说有点为时尚早。
接下来的时间,高风和李友良又进行了细胞融合和杂交瘤细胞选择的准备工作。
这两样工作对个人的操作要求很高,就拿细胞融合来讲,需要先把脾细胞与1×10^7骨髓瘤细胞SP2/0混合于一支50ml融合管中,补加不完全培养基至30ml,充分混匀。
再用离心机以1000转/min离心5-10分钟,将上清尽量吸净。
在手掌上轻击融合管底,使沉淀细胞松散均匀;
用1ml吸管在30s内加入预热的50%PEG1ml,边加边轻轻搅拌。
吸入吸管静置1min。
加入预热的不完全培养液,终止PEG作用,连续每2min内分别加入1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,10ml.
800rpm,5分钟;弃去上清。
加入5ml完全培养基,轻轻吹吸沉淀细胞,使其悬浮并混匀,然后补加完全培养基至40-50ml。分装96孔细胞培养板,每孔100ul,然后将培养板置37℃,5%CO2培养箱内培养。
6h后补加选择培养基。每孔50ul.3天后用选择培养基半换液。
经常观察杂交瘤细胞生长情况,待其长至孔底面积1/10以上时吸出上清供抗体检测。
这些步骤写出来都觉得麻烦,何况是做起来呢。高风和李友良耐着性子每天练习到很晚,但是总感觉效率很低。
“还是把嘉然和程松喊过来了吧。”高风心里大概算了算,照这个情况,2个人到时候累死也干不过来。
“人还是太少了!”李友良跟高风说,“以后看能不能再拉几个人。”
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